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熒光定量PCR人熒光激發方式有哪兩種

更新時間:2022-09-25 點擊次數:1215次
  熒光定量PCR人主要由樣品載臺、基因擴增熱循環組件、微量熒光檢測光學系統、微電路控制系統、計算機及應用軟件組成。其中基因擴增熱循環組件工作原理與傳統基因擴增儀大致相同,不同廠家不同型號的產品分別采用空氣加熱、壓縮機制冷、半導體加熱制冷等工作方式。微量熒光檢測系統由熒光激發光學部件、微量熒光檢測部件、光路、控制系統組成。
 
  常用的熒光激發方式有兩種:鹵鎢燈和LED;熒光檢測元件常用兩種方式:光電倍增管和冷光CCD攝像機,光單色元件有濾光片和光柵。在實時PCR擴增過程中,熒光信號被收集,轉化為成為擴增和熔解曲線。具體數據就是基線,熒光閾值和Ct值。
 
  傳統的PCR進行檢測時,擴增反應后需要進行染色處理及電泳分離,并且只能作定性分析,不能準確定量,易造成污染出現假陽性,使其應用受到限制。實時定量PCR技術不僅實現了對模板的定量,且具有靈敏度高、特異性和可靠性更好、自動化程度高和無污染的特點,使得熒光定量PCR逐漸取代常規PCR。
 
  在PCR擴增反應的數個循環里,熒光信號變化不大,接近一條直線,這樣的直線即是基線,這條線是可以自動生成也可以手動設置的。之后反應會進入指數增長期,這個期間擴增曲線具有高度重復性,在該期間,可設定一條熒光閾值線,它可以設定在熒光信號指數擴增階段任意位置上,但一般會將熒光閾值的缺省設置是3-15個循環的熒光信號的標準偏差的10倍。每個反應管內的熒光信號到達設定的閾值時所經歷的循環數被稱為CT值,這個值與起始濃度的對數成線性關系,且該值具有重現性。
 
  熒光定量PCR人主要用于用于科研及臨床的基因擴增、定性PCR基因擴增、熒光/酶免終點定量DNA基因擴增、基因芯片等其他基因分析應用的基因擴增等。基因擴增儀適合國內外各種PCR試劑盒傳染病類、腫瘤類、科研類。進口基因擴增儀主要由外殼、變溫反應腔、散熱系統、加熱系統、制冷系統、電子控制系統、供電系統、人機界面等各部分組成。基因擴增儀廣泛應用于各級各類醫療機構、大學及研究所、CDC、檢驗檢疫局、獸醫站、食品企業及乳品廠等。