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熒光定量PCR板該如何使用

更新時間:2022-11-25 點擊次數:1155次
  熒光定量PCR主要由樣品載臺、基因擴增熱循環組件、微量熒光檢測光學系統、微電路控制系統、計算機及應用軟件組成。其中基因擴增熱循環組件工作原理與傳統基因擴增儀大致相同,不同廠家不同型號的產品分別采用空氣加熱、壓縮機制冷、半導體加熱制冷等工作方式。微量熒光檢測系統由熒光激發光學部件、微量熒光檢測部件、光路、控制系統組成。
 
  熒光定量PCR是指在PCR擴增反應體系中加入熒光基團,通過對擴增反應中每一個循環產物熒光信號的實時檢測,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。具有靈敏度高,特異性強,能實現多重反應,據實時性和準確性等特點,廣泛應用于分子生物學研究和醫學研究等領域。
 
  PCR板有透明和乳白色可選,其中乳白色更適合用于頂部采集熒光信號的新型熒光定量PCR,但如果熒光定量PCR儀是底部光源的,則應選擇透明的。
 
  PCR板根據裙邊設計又可分為無裙邊、半裙邊和全裙邊三種設計模式,不同廠家的熒光定量PCR會設計不同的切角或邊緣凸起,請選擇適合該PCR儀的板子。
 
  PCR板又分100ul體積(矮板)和200ul體積(高板),根據機型的不同選擇,選擇不同高度孔板,避免高度錯誤對機器造成破壞和加熱不均導致數據失真。
 
  當使用96孔板做熒光定量PCR實驗的時候,推薦使用光學膜代來密封反應孔。正確的封膜方法是:先沿著96孔板的縱向壓膜,然后橫向,最后沿著板的邊緣按壓使之密封。
 
  加樣后會在管壁上飛濺一些小液滴,另外反應體系內也會有一些氣泡,需要離心去掉掛壁液滴和氣泡。請使用專用的微孔板離心機解決上述問題。
 
  PCR板屬于一次性消耗品,生產一次成型,不建議剪開使用容易造成實驗誤差增加,不能清洗或部分重復利用。不要為了節省一點小錢,而給實驗帶來后續分析上的困擾。