miRNA過表達慢病毒構(gòu)建
服務(wù)簡介：
miRNA是一種21－25nt長的單鏈小分子RNA, 是由具有發(fā)夾結(jié)構(gòu)的約70-90個堿基大小的單鏈RNA前體經(jīng)過Dicer酶加工后生成，miRNA具有高度的保守性、時序性和組織特異性.而且這種特異 性和時序性，決定了組織和細胞的功能特異性，表明miRNA在細胞生長和發(fā)育過程的調(diào)節(jié)過程中起多種作用，因此miRNA的研究受到了生物學(xué)家的廣泛關(guān) 注。
服務(wù)流程：
1、慢病毒過表達質(zhì)粒載體的構(gòu)建
設(shè)計上下游特異性擴增引物，同時引入酶切位點，PCR(采用高保真KOD酶，3K內(nèi)突變率為0%)從模板中（CDNA質(zhì)粒或者文庫）調(diào)取目的基因CDS區(qū)（coding sequence）連入T載體。將CDS區(qū)從T載體上切下，裝入慢病毒過表達質(zhì)粒載體。
2、慢病毒干擾質(zhì)粒載體的構(gòu)建
合成miRNA對應(yīng)的DNA頸環(huán)結(jié)構(gòu)，退火后連入慢病毒干擾質(zhì)粒載體
3、慢病毒載體的包裝與濃縮純化
制備慢病毒穿梭質(zhì)粒及其輔助包裝原件載體質(zhì)粒，三種質(zhì)粒載體分別進行高純度無內(nèi)抽提，共轉(zhuǎn)染293T細胞，轉(zhuǎn)染后6 h 更換為*培養(yǎng)基，培養(yǎng)24和48h后，分別收集富含慢病毒顆粒的細胞上清液，病毒上清液通過超離心濃縮病毒。
客戶提供：
1、目的基因的序列信息；
2、病毒載體要求及選擇。
收費標準/服務(wù)周期/提供結(jié)果：
詳談，我們會根據(jù)您的方案及需求制定詳細的服務(wù)協(xié)議。
【本公司合作項目】
慢病毒，腺病毒，RNAi類，分子生物實驗，病理實驗，免疫學(xué)實驗，細胞實驗，動物實驗，蛋白組學(xué)實驗等，能夠進行藥效學(xué)評價、毒理學(xué)評價、細胞藥篩、動物建模、病理檢測、蛋白組學(xué)、代謝組學(xué)、高通量測序、ChIP、CO-IP、生物信息學(xué)分析服務(wù)！
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